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动物源性食品中抗病毒类药物残留量测定的前处理方法2021年04月02日 10:35  来源: 坛墨质检科技股份有限公司   >>进入该公司展台分享:抗病毒类药物的危害及检测目的

抗病毒类药物主要包括金刚烷胺、金刚乙胺、美金刚、吗啉胍等。金刚烷胺和金刚乙胺是第/一批被允许用来治疗A型禽流感病毒的*药,两者都属于穿入和脱壳抑制剂,抑制病毒的繁殖。研究发现,金刚烷胺可以引起角膜水肿,高剂量摄入时表现出一定的毒性。美金刚和金刚乙胺互为同分异构体,但其性质和作用机理却并不相同。美金刚原被广泛用于中枢神经系统的治疗,具有一定的神经毒性。吗啉胍又被称为病毒灵,是一种广谱抗病毒类药物,对甲型和乙型流感病毒、副流感病毒、鼻病毒、呼吸道合胞体病毒等有较好的治疗效果,剂量过大会引起多汗、恶心、低血糖等不良反应。我国在1999年12月将吗啉胍列为禁用药,2005年中华人民共和国农业部第560号公告将金刚烷胺、金刚乙胺、利巴韦林和吗啉胍这4种抗病毒类药物列为禁用兽药,禁止用于动物生产。虽然抗病毒/药属动物禁用药物,但其在动物养殖过程中依然被广泛使用。若饲养者不科学、不合理地使用该类药物,易导致药物在畜禽机体内残留与富集,不仅会造成畜禽中毒,也会引起病毒耐药毒株的出现,使抗病毒/药物有效性降低,其耐药性也有转移扩散到人体的风险,对消费者的健康存在很大的隐患。

本文阐述了如何将抗病毒类药物从样品基质中分离提取出来,并经过净化后,转化成液质联用仪可以检测的形式。以提取、净化为重点,依据行标SN/T 4253-2015,为检测人员和相关领域研究人员提供一定的参考。

    

检测项目:金刚乙胺、金刚烷胺、美金刚、吗啉胍、咪喹莫特、奥司他韦、阿昔洛韦

应用范围:鸡肉、鸡肉制品、猪肉、肝脏、鱼、虾、蛋、皮蛋等动物组织

   液相色谱-质谱/质谱法   

方法原理:试样中7种抗病毒类药物用三氯乙/酸-乙腈混合溶液提取并沉淀蛋白,经混合型阳离子交换固相萃取柱净化后,液相色谱-质谱/质谱仪测定,内标法定量。

前处理仪器:分析天平(感量0.1 mg和0.01 g);组织捣碎机、高速冷冻离心机(4 ℃冷冻,18000 r/min);离心机(5000 r/min);涡旋混合器;pH计;氮吹仪;固相萃取装置。

检测仪器:HPLC-MS/MS+ESI源

试样制备与保存

鸡肉、肝脏、鱼肉放在组织捣碎机均质,充分混匀,均分成2份,分别装入清洁容器内,并标明标记;鸡肉制品取鸡肉部分;蛋、虾去壳后取可食部分放在组织捣碎机均质,充分混匀,均分成2份,分别装入清洁容器中,并标明标记。

制样操作过程中,应尽可能防止样品受到污染或发生残留物含量的变化。

试样于-18 ℃以下保存,新鲜或冷冻的组织样品可在2 ℃~6 ℃贮存72 小时。

前处理方法

   1.提取   

称取试样5 g(精/确至0.01 g)于50 mL离心管中,加入0.1 mL内标标准工作溶液(0.1 μg/mL),加入15 mL三氯乙/酸乙腈(90+10)溶液,加盖后在超声波发生器中超声10 min,再旋涡混匀3 min,4 ℃条件下15000 r/min离心5 min,取出上清液,再加入10 mL三氯乙/酸乙腈溶液重复提取一次,离心后合并上清液至25 mL的容量瓶中,用乙腈定容至刻度。

   2.净化   

分别用3 mL甲醇、3 mL水和3 mL2 %甲酸水溶液活化混合阳离子交换固相萃取小柱(60 mg,3 mL),准确移取5 mL上清液加入到小柱中,依次用5 mL2 %甲酸水溶液和3 mL 1 %甲酸乙腈淋洗,弃去全部流出液;然后真空抽干小柱5 min,用4.0 mL洗脱溶液(氨水乙酸铵甲醇2.5+2.5+95)洗脱至10 mL玻璃管中,在50 ℃用氮气浓缩仪吹至近干。准确加入1.0 mL乙腈-甲醇-水溶液(70+10+20)溶解残渣,涡旋30 s后过0.2 μm滤膜,供液质测定。此样液应在48 h内测定完毕。

注意事项

1.标准物质分别用甲醇配制成100 μg/mL的标准储备液,其中阿昔洛韦先用少量二甲基亚砜溶解,再用50 %甲醇水配成100 μg/mL的标准储备液,在-18 ℃避光保存,可使用6个月。2.本方法使用了金刚烷胺D6、美金刚D6、阿昔洛韦D4同位素内标进行回收率的校正。3.本方法使用三氯乙/酸-乙腈提取并沉淀蛋白,MCX固相萃取柱净化。

4.MCX固相萃取柱的净化过程是“酸上样、碱洗脱”。淋洗后一定抽干小柱,防止水相进入洗脱液。氨化洗脱液一定要现用现配,防止氨水挥发,导致目标化合物洗脱不下来。

5.氮气浓缩过程中,吹至近干潮湿状态,定容后采取涡旋加超声的方式复溶,可以提高回收率。

6.金刚烷胺的残留检测,有GB 31660.5-2019作为依据,应根据需求进行选择使用。并注意其他药物检测方法的更新。

 

参考文献

SN/T 4253-2015 出口动物组织中抗病毒类药物残留量的测定 液相色谱―质谱/质谱法

 

图1 抗病毒类药物残留量测定的前处理流程图

 

抗病毒类药物标准品信息表

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