超具体的临床操作流程

免疫组化

一 实验目的:分别用KRAS、NRAS、HRAS蛋白抗体检测肺癌组织中KRAS、NRAS、HRAS蛋白的表达情况

二 实验原理: 应用免疫学基本原理——抗原抗体反应,即抗原与抗体特异性结合的原理,通过化学反应使标记抗体的显色剂(荧光素、酶、金属离子、同位素)显色来确定组织细胞内抗原(多肽和蛋白质),对其进行定位、定性及定量的研究,称为免疫组织化学技术或免疫细胞化学技术.

三 实验试剂及耗材:经病理医生确认的肺癌组织切片、KRAS、NRAS、HRAS蛋白抗体、DAB显色试剂盒、抗原修复液、PBS、苏木素染料、1%盐酸酒精溶液、0.05%氨水、二甲苯、等

四 实验设备:切片机、4℃冰箱、显微镜、烤片机

五 主要试剂配置:

缓冲液

应用液A NaH2PO438.4g配成1000毫升溶液

应用液B Na2HPO4·12H2O 114.8g配成1000毫升溶液

配制1000毫升PBS需要14毫升应用A液,36毫升应用B液,加8.5gNaCl。

枸橼酸钠抗原修复液

应用液A 枸橼酸 10.55g配成1000毫升溶液 应用液B 柠檬酸三钠(三水合柠檬酸三钠)29.01g 配成1000毫升溶液 配制500毫升抗原修复液需要9毫升应用A液,41毫升应用B液。

苏木素染液配方:苏木素2g,无水乙醇250毫升,硫酸铝17.6g蒸馏水750毫升,碘酸钠0.2g,冰醋酸20毫升。先将苏木素溶于无水乙醇,再将硫酸铝溶于蒸馏水水中。两液溶解后将其混合,加入碘酸钠,最后加入冰醋酸。

抗体说明书建议的抗体稀释度

N-Ras 1:50-1:500

H-Ras 1:50-1:500

K-Ras 1:20-1:200

六 实验步骤:

1组织常规石蜡切片厚度3-5um,防脱片捞片后晾干,放入72℃烤箱烤片2小时。 2 切片脱蜡水化程序

(聊城荣恒医疗器械有限公司)